Flow cytometry là gì

     
Flowcytometry là kỹ thuật có chức năng đo được các đặc tính huỳnh quangquang họccủa một tế bào solo hoặc các hạt như vi sinh vật, nhân với nhiễm sắc đẹp thể được chuẩnbị trong dung dịch lỏng khi chúng đi sang 1 nguồn sáng. Các máy flow cytometryđầu tiên là một trong những thiết bị đơn thông số kỹ thuật (single-parameter) chỉ được áp dụng đểphát hiện form size của tế bào. Hiện nay, những thiết bị cùng với độ phức tạp cao cókhả năng phát hiện bên cạnh đó 14 thông số đang được phạt triển. Qui định cơ bảncủa kỹ thuật này liên quan tới ánh nắng tán xạ và tia nắng huỳnh quang vạc ra,được tạo thành do nguồn sáng kích say đắm (thường là chùm tia laze). Các thông sốthu được rất có thể là thông tin giá trị về những khía cạnh hóa sinh, sinh lý cùng phântử của hạt. Ánh sáng tán xạ trong kỹ thuật có liên quan trực tiếp tới những đặcđiểm kết cấu và sắc thái học của tế bào, trong lúc đó, ánh sáng huỳnh quangcó xuất phát từ các đầu dò đánh dấu huỳnh quang, tỉ lệ thành phần thuận với lượng đầu dòhuỳnh quang tích hợp tế bào và các thành phía bên trong tế bào. Gồm hai nhiều loại flowcytometry khác biệt là non-sorting (không phân loại) cùng sorting (phân loại).

Bạn đang xem: Flow cytometry là gì

Bạn sẽ xem: Flow cytometry là gì

FASC (Flourescent activated cell sorters) là các máy đếm tế bào theo cái chảycó năng lực phân loại những thế bào được lưu lại huỳnh quang xuất phát điểm từ một hỗn phù hợp cácquần thể tế bào.Đầu tiên, các hạt đang được mang tới đèn laze trong mộtdòng hóa học lỏng. Ngẫu nhiên hạt phối hợp hoặc tế bào nào có kích thước từ 0.2-150 µmđều phù hợp; những tế bào từ những mô rắn buộc phải được thải trừ trước khi phân tích.Khi các hạt trải qua tia laze, chúng tán xạ ánh nắng laze, tia nắng tán xạ với ánhsáng huỳnh quang sẽ được thu trên thấu kính tại vị trí thích hợp. Sự phối hợp giữabộ phận bóc chùm tia và những kính lọc đang hướng tia nắng tán xạ và ánh sáng huỳnhquang cho tới detector; ở đầu cuối các detector sẽ khởi tạo ra tín hiệu điện tỉ trọng thuậnvới dấu hiệu quang học. Cácthành phần chính của dòng sản phẩm flow cytometer (đếm tế bào theo dòng chảy) cùng cellsorter (phân một số loại tế bào) bao gồm: hệ dung dịch, hệ thống quang học (ánh sángkích ưa thích và cỗ thu ánh sáng kích thích), mạng lưới điện (detector) với một máytính. Khối hệ thống dung dịch gồm trách nhiệm điều hướng dòng hỗn hợp chứa những hạttới mối cung cấp sáng. Hệ thống quang học kích ưa thích sẽ tập trung nguồn sáng tới các tếbào/ những hạt, còn hệ thống quang học tập thu nhận đang chuyển những ánh sáng sủa tán xạ hoặcánh sáng huỳnh quang tới mạng lưới năng lượng điện tử. Màng lưới điện sẽ thấy tín hiệuvà chuyển các tín hiệu thành những thông tin số tỉ lệ thuận với độ mạnh ánh sángvà máy tính xách tay sẽ phân tích những thông tin này. Kỹthuật flow cytometry được sử dụng thoáng rộng trong nhiều ứng dụng nhằm mục tiêu phát hiệncác kháng nguyên màng, tế bào chất và nhân. Bên cạnh ra, toàn cục tế bào và những thànhphần tế bào như bào quan, nhân, DNA, RNA, nhiễm sắc đẹp thể, cytokines, hormone vàprotein hoàn toàn có thể được vạc hiện trải qua kỹ thuật này. Việc phân tích các quátrình trong tế bào và quy trình tế bào nhờ bài toán đo lượng calcium cùng điện thếmàng cũng là một trong những ứng dụng của flow cytometry. Nội dung bài viết dưới phía trên sẽtrình bày kỹ rộng về các thành phần của một lắp thêm flow cytometry.

Xem thêm: Top Thương Hiệu Máy Giặt Lông Ngang Tốt Nhất 2018, Máy Giặt Lông Ngang Tốt Nhất 2018

Hệthống dung dịch bao gồm vai trò vận chuyển những tế bào vào một dung dịch đi qua thiếtbị nhằm thu được những dữ liệu, khối hệ thống này bao hàm 2 thành phần: sheath fluid (dòngdung dịch bảo vệ/ loại dung dịch bên ngoài) và pressurized line (dòng áp suất).Sheath fluid là 1 trong dung dịch trộn loãng (thông hay là đệm PBS- phosphate-bufferedsaline), được tiêm vào buồng flow nằm tại vị trí trung trọng tâm của thiết bị do dòng áp suất.Một áp suất không khí cũng rất được tiêm vào các tế bào đã có hòa tan trong ống mẫuvào bên trong buồng flow. Loại mẫu sẽ tiến hành đưa vào lõi trung trung ương mà xung quanglà dòng dung dịch bảo vệ và vươn lên là dòng lõi (core fluid- một mẫu rất thon chỉđể từng tế bào hoặc từng phân tử đi qua), được tạo ra dựa trên sự biệt lập áp suấtgiữa dòng dung dịch phía bên ngoài (sheath fluid) và cái mẫu (sample fluid), từ đógiúp triệu tập tế bào/hạt có trong chủng loại thành chiếc tế bào đơn để đi qua chùm tialaze. Vì chưng đó, quá trình này chất nhận được chiếu sáng đồng những mỗi tế bào cần được gọilà quá trình tập trung thủy động lực học (hydrodynamic focusing).


*

Tỷlệ đưa các tế bào vào chùm tia laze hoàn toàn có thể được triển khai nhờ hệ thống máy flowcytometer dựa trên mục đích của phân tích. Ví dụ, tỉ lệ chiếc chảy cao hay sửdụng cho việc đo lường như immunophenotyping làm việc tế bào động vật hoang dã có vú, trong khiđó, tỉ lệ cái chảy thấp hay thích phù hợp với các áp dụng yêu mong độ phân giảicao như đối chiếu thành phần DNA. Các thông số quan trọng quan trọng thu được nhờsự tiếp xúc các hạt với chùm tia laze dựa vào vào hoạt động tối ưu của những hệthống dung dịch. Bởi vì đó, phải phải bảo vệ rằng không tồn tại bong nhẵn khí và những mảnhvụn trong hệ thống này để áp lực nặng nề sẽ đồng số đông ở đều thời gian.Hệthống quang học trong thứ flow cytometry làm trọng trách chiếu tia nắng kích thíchbao tất cả đèn laze, thấu kính và thành phần thu ánh sáng. Thấu kính gồm vai trò địnhhình và triệu tập chùm tia laze. Ánh sáng laze được sản xuất ra bằng cách kích thíchcác điện tử (electron) vẫn ở tâm trạng cơ bản lên tâm lý kích thích bao gồm mứcnăng lượng cao nhờ năng lượng điện áp, sau một thời hạn ngắn (thường là 10-7 –10-8 giây), các điện tử sẽ trở về trạng thái cơ phiên bản và vạc ra nănglượng dưới dạng các photon ánh sáng. Sau khi laze chiếu vào tế bào, đông đảo ánhsáng bị chệch hướng so với mặt đường tryền thẳng do gặp gỡ phải vật cản được gọi làánh sáng tán xạ. Tất cả hai loại ánh sáng tán xạ là forward scatter (FSC) cùng sidescatter (SSC). Những yếu tố ảnh hưởng tới sự tán xạ ánh nắng là màng tế bào,nhân, những hạt của tế bào, làm ra và mặt phẳng tế bào. Nhìn chung kích thước củatế bào hoặc của một hạt với độ phức tạp bên phía trong tế bào được quánh hiệu vị loạitán xạ. Ánh sáng sủa FSC là kết quả của sự nhiễu xạ thu được dọc theo trục của chùmtia tới laze. FSC tỉ trọng với diện tích bề mặt hoặc kích cỡ tế bào và phù hợpđể phát hiện, phân biệt các hạt về kích thước, thường xuyên sử dụng phổ cập trongimmuophenotyping. Còn tia nắng SSC bao hàm hầu hết những ánh sáng khúc xạ và nhiễuxạ, được thu ở góc cạnh 90o so với chùm tia tới laze. SSC tỉ trọng với thànhphần các hạt hoặc độ phức tạp bên trong tế bào. Kề bên đó, tia nắng huỳnhquang có nguồn gốc từ phòng thể hoặc dye đánh dấu huỳnh quang như thể PI cũng đượcphản xạ tại cùng một góc với SSC.



Hình 2: Ánh sáng tán xạ (lightscattering). FSC tỉ trọng với kích thước, trong những khi đó SSC tỉ lệ thành phần với những thành phầnvà độ phức tạp bên phía trong tế bào. Córất nhiều cấu hình laze trong thứ flow cytometer dựa trên loại chất huỳnh quangđược kích thích. Đèn argon tia laze (một đèn laze thông thường với bước sóng kíchthích 488 nm) được áp dụng để kích thích những dye tổng đúng theo như fluoresceinisothiocyanate (FITC) và dye huỳnh quang thoải mái và tự nhiên như tảo và phytoplankton. Rấtnhiều thiết bị flow cytometer và sorter tất cả thêm đèn laze có công dụng kích say đắm chấthuỳnh quang quẻ ở bước sóng kích mê thích ở dải sóng UV (300-400nm) hoặc red diodekích thích chất huỳnh quang sinh hoạt dải sóng đỏ (630 nm).

Xem thêm: Wp Là Gì - Công Suất Wp Của Pin Mặt Trời Là Gì

Hệthống thu nhận ánh nắng gồm thấu kính để thu ánh nắng phát ra từ sự tương tácgiữa chùm tia laze với hạt; một khối hệ thống gương cùng kính thanh lọc để bóc tách và sau đó hướngánh sáng có bước sóng đặc hiệu cho detector đam mê hợp.